De grote hoornuil is een toppredator met weinig natuurlijke vijanden, maar er zijn een paar soorten bekend die erop jagen:
- Steenarenden: Grote, krachtige roofvogels die jagen door te zweven en te duiken om prooien te vangen, inclusief grote hoornuilen.
- Haviken: Behendige bosjagers die prooien overvallen vanuit boomzitplaatsen.
- Grijze uilen: Krachtige uilen die stil door bossen jagen en op grote hoornuilen kunnen jagen.
